NOUVEAUX COMPOSES DE TYPE 5-ACYLSULFANYL-HISTIDINE EN TANT
QUE PRECURSEURS DES 5-SULFANYLHISTIDINES CORRESPONDANTES ET
DE LEURS DISULFURES
La présente invention a pour objet :
de nouveaux composés de type 5-acylsulf anyl -
histidine (et leurs dérivés) ;
leurs procédés de préparation ;
- leur utilisation en tant que précurseurs des 5 -
suifanylhistidines correspondantes et de leurs
disulfures .
La présente invention concerne de nouveaux
composés de type 5-acylsulf anyl -histidine et leurs
dérivés, ainsi que leurs modes de préparation et leur
utilisation en tant que précurseurs des 5 -
sulfanylhistidines correspondantes et de leurs
disulfures. Plus particulièrement, cette invention
relate la synthèse de nouveaux composés de type 5 -
acylsulf anyl -histidine et leurs dérivés, de leurs sels
en tant que précurseurs directs des 5 -
sulfanylhistidines correspondantes et de leurs
disulfures. La nomenclature récente IUPAC « suifanyl »
pour le groupement « -SH » est appliquée pour les
composés décrits dans l'invention au lieu des
différents termes utilisés auparavant dans la
littérature tels que « thiohistidine » ,
« thiolhistidine » ou « mercaptohistidine » .
ETAT DE LA TECHNIQUE
Le groupement 5-sulfanyl-imidazole est rarement
retrouvé dans la Nature (Caroll A . et Avrey V.M. ; J .
Nat. Prod. ; 2009 ; 72 ; 696-699). Très peu de produits
naturels comportant un squelette 5-sulf anyl -histidine
(méthylé ou non en position 3 du noyau imidazole) ont
été mis en évidence à ce jour (Hand CE. et Honek J.F.;
J . Nat. Prod.; 2005 ; 68 ; 293-308). Ils sont d'origine
bactérienne ou marine pour la plupart. Un premier
exemple est constitué par le groupe des adénochromines
A , B et C (Ito S . et Prota G . ; JCS Chem. Comm. ;
1977 ; 251-252 ; Rossi F., Nardi G., Palumbo A . et
Prota G . ; Comp. Biochem. Physiol. 1985, 80b, 843-845)
et des séco-adénochromines A , B et C (Ito S., Nardi G .
et Prota G . ; JCS Chem. Comm. ; 1976 ; 1042) .
L 'imbricatine , produite par Dermasterias imbricate,
constitue un second exemple (Pathirana C . et Andersen
R.J. ; J . Am. Chem. Soc. ; 1986 ; 108, 8288-8289). Les
ovothiols A , B et C (Turner E ., Klevit R.E. et Shapiro
B .M . ; J . Biol . Chem. ; 1986 ; 261 ; 13056) constituent
un troisième exemple du groupe encore plus restreint de
produits naturels comportant un squelette 5-sulfanylhistidine
méthylé en position 3 (Ά noter que la
position du groupement méthyle a été, initialement ,
faussement localisée sur l'azote NI de l'histidine,
comme ceci a été démontré dans Holler et al. JOC 1987,
4421-4423 vs . Palumba et al., THL 1982, 3207-3208) .
Très récemment un nouvel alcaloïde indolique, contenant
un squelette 5-sulf anyl -histidine , la leptoclinidamine
C a été mis en évidence (Caroll A . et Avrey V.M. ; J .
Nat. Prod. ; 2009 ; 72 ; 696-699) .
La biosynthèse des ovothiols A , B et C a été
décrite (Vogt R.N. , Spies H.S.C. et Steenkamp D.J. ;
Eur. J . Biochem. ; 2001, 268, 5229-5241) .
L'introduction du soufre, en position 5 du noyau
imidazole de la L-histidine, est réalisée en présence
de l'enzyme suif oxyde synthase (OvoA) , ainsi que de fer
ferreux (Fe2+) et d'oxygène 02 . La L-cystéine est
utilisée comme donneur de soufre pour aboutir à un
intermédiaire sulfoxyde (Braunshausen A . et Seebeck
F . ; JACS ; 2011 ; 133, 1757). Ce dernier est ensuite
transformé en ovothiol A , B ou C en présence de
l'enzyme sulfoxyde lyase et de phosphate de pyridoxal,
son cofacteur (Mashabela G . et Seebeck F . ; JCS Chem.
Co . ; 2013, 7714-7716) .
La préparation de la 2-suifanylhistidine et de
ses dérivés par synthèse chimique a déjà été documentée
par la Demanderesse (brevet US 13/121,891 et brevet US
13/500, 887 Al) .
La préparation de la 5-sulf anylhistidine et de
ses dérivés par synthèse chimique s'est avérée
beaucoup plus difficile que celle de leurs isomères 2 -
sulfanylhistidines . Plusieurs stratégies de synthèse
ont été envisagées et testées sans succès. A ce jour,
seules 2 voies d'accès ont permis d'aboutir uniquement
à la série des 5-sulfanyl-3-méthyl-histidines . La
première approche a consisté en la synthèse de novo du
noyau 5-sulf anyl -imidazole (Hopkins P . et al . ; JOC ;
1987, 52, 2977 et 4420) dans le cadre de la synthèse
des ovothiols A et C en 10 à 12 étapes. La seconde
approche a consisté en une substitution nucléophile
d'un noyau 5-bromo- imidazole activé par un groupement
électro-attracteur carboxaldéhyde CHO (Ohba M .,
Nishimura Y., Kato M . et Fujii T . ; Tetrahedron ;
1999, 55, 4999-5016) dans le cadre de la synthèse de
1'imbricatine . Actuellement il n'existe aucune méthode
chimique non-enzymatique connue d'introduction directe
d'un atome de soufre sur l'histidine ou l'un de ses
dérivés en position 5 du noyau imidazole.
L'article de SPALTENSTEIN dans « the journal of
organic chemistry, vol 52, N ° 14, P 2977-2979,
divulgue un procédé de préparation d'un composé 8
(p. 2978) obtenu par cyclisation du thionoamide
correspondant mais celui-ci ne peut correspondre à
aucun composé de l'invention au vu des éléments
techniques suivants.
De même, l'article de Heng Song dans Organic
Letters, Vol 15, N ° 18, 20 septembre 2013, P 4854-
4857, intitulé « Regioselect ivity of the oxidative C -
S Bond Formation in Ergothioneine and Ovothiol
Biosyntheses » divulgue un composé Ovothiol (8)
(p. 4855, schéma 1 ) mais qui ne correspond à aucun
composé de l'invention au vu des éléments techniques
suivants .
En effet, comme précédemment évoqué page 2 ligne
16-20, la structure initiale des Ovothiols A , B et C a
été incorrectement définie dans ces deux articles de
SPALTENSTEIN et Song par rapport au positionnement du
groupement méthyle sur l'azote du cycle imidazole de
l'histidine. Initialement faussement localisée sur
l'azote NI de l'histidine, ce groupement méthyle a été
« repositionné » sur l'azote N3 comme ceci a été
démontré dans Holler et al. JOC 1987,20 4421-4423 vs .
Palumba et al., THL 1982, 3207-3208).
Ainsi, la structure des Ovothiols A , B et C est bien
établie suite à la publication de Holler et al. (JOC
1987,20 4421-4423, déjà citée dans la demande et
acceptée par la communauté scientifique d'après les
exemples suivants :
Ovothiol C : voir Bailly et al., Bioorg. Med.
Chem., 2003, 11, 4623-4630 figure 1 p . 4624 ;
Ovothiols A , B et C : voir De Luna et al., J . Phys .
Chemistry, 2013, DOI : 10 .1021/ jp402514w ;
Ovothiol A : voir Mashabela et al., Chem. Comm. ,
2013, 49, 7714- 7716.
Comme les documents SPALTENSTEIN et Song sont basés
sur la localisation erronée du méthyle en position
NI, alors qu'il doit être correctement localisé en
position N3 , ceci a pour conséquence que le composé 8
de SPALTENSTEIN ou de Song (avec la structure
rectifiée) correspond au proviso de la formule (II) de
l'invention décrite ci-après.
Les composés de type 5-acylsulf anyl-histidine et
leurs dérivés constitueraient de très bons précurseurs
de 5-suifanylhistidine et de ses dérivés. Ces composés
de type 5-acylsulf anyl -histidine et leurs dérivés
n'étant pas connus, il faudrait donc pouvoir disposer
d'une méthode de synthèse qui permette d'introduire
directement un groupement acylsulf anyle en position 5
d'une histidine. Une telle méthode, à notre
connaissance, n'a jamais été décrite jusqu'à ce jour.
Cette nouvelle méthode d'introduction directe d'un
groupement acylsulf anyle en position 5 de l 'histidine
ou de l'un de ses dérivés serait d'autant plus
intéressante qu'elle pourrait être réalisée sans
groupement protecteur et dans l'eau comme solvant de
réaction .
BUTS DE L'INVENTION
L'un des buts de la présente invention est donc
de mettre à disposition de nouveaux composés de type 5 -
acylsulf anyl -histidine et leurs dérivés susceptibles
d'être des précurseurs des 5-sulf anylhistidines
correspondantes et de leurs disulfures.
Un autre but de la présente invention est un
procédé de préparation de ces nouveaux composés de type
5-acylsulf anyl-histidine et leurs dérivés utilisant une
nouvelle méthode d'introduction directe d'un groupement
acylsulf anyle en position 5 d'une histidine ou de l'un
de ses dérivés sans groupement protecteur et dans l'eau
comme solvant .
Un autre but de la présente invention est
l'utilisation de ces nouveaux composés de type 5 -
acylsulf anyl -histidine et leurs dérivés en tant que
précurseurs des 5-sulfanylhistidines correspondantes et
de leurs disulfures.
Ces buts sont atteints grâce à la présente
invention qui repose sur la conception et la
préparation de nouveaux composés de type 5 -
acylsulf anyl -histidine et de leurs dérivés qui
s'avèrent être d'excellents précurseurs des 5 -
sulfanylhistidines correspondantes et de leurs
disulfures en utilisant une nouvelle méthode
d'introduction d'un groupement acylsulf anyle . Ceci a
été exemplifié par la Demanderesse.
DESCRIPTION DE L'INVENTION
La présente invention a donc pour but :
1 ) de résoudre le problème technique consistant
en la fourniture de nouveaux composés de type 5 -
acylsulf anyl-histidine et leurs dérivés,
constituant ainsi des précurseurs des 5 -
sulfanylhistidines correspondantes et de leurs
disulfures ;
2 ) de résoudre ce problème technique selon une
solution qui englobe un procédé de préparation de
ces nouveaux dérivés 5-acylsulfanyl-histidine en
utilisant une nouvelle méthode d'introduction
directe d'un groupement acylsulf anyle en position
5 du noyau imidazole d'une histidine sans
groupement protecteur et dans 1'eau comme solvant
de réaction.
Les problèmes techniques énoncés ci-dessus sont
résolus pour la première fois d'une manière simultanée
par la présente invention, de façon très aisée et
économique, le procédé de préparation desdits nouveaux
dérivés 5-acylsulfanyl-histidine étant très simple à
mettre en oeuvre tout en fournissant de bons
rendements .
Selon son premier aspect, la présente invention a
pour objet de nouveaux composés de type 5-acylsulf anyl -
histidine et leurs dérivés répondant à la formule générale
(I) suivante :
(I)
Dans laquelle :
R1 = H , alkyle, en particulier CH3 ;
R2 = R3 = H , alkyle, en particulier CH3 ;
R4 = H , alkyle, en particulier CH3, alkyle (C=0) ,
alkyle substitué (C=0) , aryle (C=0) , -alanyle (H 2NCH2CH2 (C=0) ;
-amino-acyle ;
R5 = alkyle, en particulier méthyle, phényle ;
L'invention englobe tous les stéréoisomères ,
diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de
l'atome de carbone portant le groupement COOH, pris
isolément ou en mélange.
Elle englobe également tous les sels d'acides
pharmaceutiquement acceptables desdits composés de formule
générale (I) .
Parmi les composés de formule générale (I) , l'invention a
notamment pour objet :
- ceux caractérisés en ce que R4 représente hydrogène,
ou le groupe méthyle, ou le groupe acétyle, ou le
groupe benzoyle, ou le groupe -
alanyle (H 2NCH2CH2 (C=0) ;
- ceux préparés dans la partie expérimentale,
notamment
1 . la L-5-acétylsulf anyl-histidine (Composé 1 ) ;
2 . la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N (diméthyl) -histidine
(Composé 2 ) ;
3 . la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,N (triméthyl) -histidine
(Composé 3 ) ;
4 . la L-5-acetylsulfanyl-a,N (glycinyl) -histidine
(Composé 4 )
5 . la L-5-acetylsulfanyl-a,N,N (diméthyl) -1-méthylhistidine
(Composé 5 )
6 . la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,N (triméthyl) -1-méthylhistidine
(Composé 6 )
7 . la L-5-acetylsulfanyl-a,N (L-alanyl) -histidine
(Composé 7 )
8 . la L-5-acétylsulfanyl-a,N (pentanoyl) -histidine
(Composé 8 )
9 . la L-5 -acétylsulf anyl- , (méthyl) -histidine
(Composé 9 ) ;
10. la L-5-acétylsulfanyl-a,N (acétyl) -histidine
(Composé 10) ;
11. la L-5-acétylsulfanyl-a,N (benzoyl) -histidine
(Composé 11) ;
12. la L-5-acétylsulf anyl- , (-alanyl) -histidine
(Composé 12) ;
13. la L-l-méthyl-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé
13) ;
14. la L-5 -benzoylsulf anyl -histidine (Composé 14) ;
15. la L-5-benzoylsulfanyl-a,N,N (diméthyl) -histidine
(Composé 15) ;
16. la L-5-benzoylsulfanyl-a,N,N,N (triméthyl) -histi
dine (Composé 16)
17. la L-5 -acétylsulf anyl -, (L-phénylalanyl )-
histidine (Composé 17) .
Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on
peut citer, à titre non limitatif, les acides minéraux tels
que chlorhydrique , bromhydrique , iodhydrique, sulfurique,
tartrique, phosphorique ou avec les acides organiques tels
que les acides formique, acétique, trif luoro-acétique ,
propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique,
citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcanesulfoniques
tels que les acides méthane- suifonique,
trif luorométhane-sulfonique, éthane- suifonique, arylsulfoniques
tels que les acides benzène- et paratoluènesulfonique
.
Dans la formule (I) ci-dessus :
- par radical alkyle, il est entendu un groupement
comportant 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou cyclique,
éventuellement ramifié,
par radical alkyle substitué, il est entendu un
groupement alkyle substitué par un ou plusieurs atomes de
fluor, ou substitué par un groupement alkényle comportant
une ou plusieurs doubles liaisons carbone -carbone, ou
substitué par une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2 ou
COOH, ainsi que leurs énantiomères , et leurs
diastéréoisomères .
par radical aryle, il est entendu un groupement
phényle éventuellement fluoré ou polyfluoré, et comportant
éventuellement une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2
ou COOH
- par radical -amino-acyle , il est entendu le radical
acyle de tout amino-acide protéogénique, c'est à dire tout
amino-acide entrant dans la composition des protéines
retrouvées dans le monde végétal, animal, y compris
1'homme .
Selon un second aspect, l'invention a également pour
objet un procédé A de préparation des nouveaux composés de
type 5-acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés de formule
générale (I) , explicité sur la Figure 1 jointe, et
caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
1 ) La réaction de l'histidine, racémique (DL) ou l'un
de ses énantiomères (D ou L ) , ou
l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en
position 1 du noyau imidazole, racémique (DL) ou
l'un de ses énantiomères (D ou L ) ,
ou
- l'un de ses dérivés alkylé ou acylé sur l'azote
de la fonction -amine, racémique (DL) ou l'un
de ses énantiomères (D ou L ) ,
ou
l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en
position 1 du noyau imidazole et alkylé ou acylé sur
l'azote de la fonction -amine, racémique (DL) ou
l'un de ses énantiomères (D ou L ) ,
en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou
organique, avec
a ) un agent générateur d'ion halogénium X+ dans un
solvant protique polaire, à température comprise
entre 0-25°, puis avec
b ) un réactif soufré de type acide carbothioïque de
formule alkyle C(=0)SH ou l'un de ses sels dans un
solvant protique polaire,
2 ) puis éventuellement la purification par
chroma tographie liquide sur colonne ou toute autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art .
Selon un mode de réalisation particulier du procédé A selon
l'invention : l'agent générateur d'ion halogénium X+ peut
être :
a ) du brome Br2 (en tant que réactif commercial ou
préparé in situ) ; ou
b ) du NBS ou tout dérivé N-bromo- imide et N-bromoamide
Selon un autre mode de réalisation particulier de ce
procédé A selon l'invention, le solvant protique polaire
peut être de l'eau ou une solution aqueuse.
Selon encore un mode de réalisation particulier du procédé
A selon l'invention, le réactif soufré de type acide
carbothioïque peut être par exemple l'acide thioacétique ;
ou l'acide thiobenzoïque, ou leurs mélanges.
Selon un autre mode de réalisation particulier du procédé A
selon l'invention, le réactif soufré de type sel d'acide
carbothioïque peut être par exemple le thioacétate de
potassium, éventuellement en mélange avec un acide
carbothioïque précité.
Selon encore un autre mode de réalisation particulier de ce
procédé A selon l'invention, la température sera comprise
entre 0-5°C.
Le caractère innovant de ce procédé A repose sur une
nouvelle réaction d'introduction directe d'un groupement
acylsulf anyle RC(=0)S en position 5 du noyau imidazole de
l'histidine ou de l'un de ses dérivés sans utilisation de
groupement protecteur et dans l'eau comme solvant de
réaction. Ceci est d'autant plus surprenant que, dans les
mêmes conditions opératoires, l'utilisation de la cystéine
en lieu et place de l'acide carbothioïque conduit à une
introduction du soufre en position 2 du noyau imidazole
comme montré dans le brevet US 13/121,891 et le brevet US
13/500, 887 A l .
Selon un troisième aspect, la présente invention a pour
objet l'utilisation des composés 5-acylsulf anyles précités
de formule (I) ou de ses dérivés, pour la préparation de
composés 5-suifanyle-histidines correspondants et leurs
disulfures décrits ci-après.
Selon un quatrième aspect, l'invention couvre de
nouveaux composés de type 5-suifanylhistidine et leurs
dérivés répondant à la formule générale (II) suivante :
(II)
Dans laquelle :
R à R4 sont tels que définis pour les radicaux
R à R4 de la formule (I) , en particulier : R1 = H , alkyle,
en particulier CH3 ; R2 = R3 = H , alkyle, en particulier
CH3 ;
R4 = H , alkyle, en particulier CH3, alkyle (C=0),
alkyle substitué (C=0) , aryle (C=0) , -
alanyle (H 2NCH2CH2 (C=0) ; -amino-acyle ;
étant entendu que lorsque R1 = H alors R2, R3 et
R4 ne peuvent pas être simultanément H .
L'invention englobe tous les stéréoisomères ,
diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de
l'atome de carbone portant le groupement COOH, ainsi que
tous les disulfures correspondants, pris isolément ou en
mélange .
Elle englobe également tous les sels d'acides
pharmaceutiquement acceptables desdits composés de formule
générale (II) .
Parmi les composés de formule générale (II) ,
l'invention a notamment pour objet :
- ceux caractérisés en ce que R4 représente hydrogène,
ou le groupe méthyle, ou le groupe acétyle, ou le
groupe benzoyle, ou le groupe -
alanyle (H 2NCH2CH2 (C=0) ;
- ceux préparés dans la partie expérimentale,
notamment :
1 . le disulfure de la L-5 -suifanyl - , (méthyl )-
histidine (Composé 22) ;
2 . la L-5-sulf anyl- , (méthyl) -histidine (Composé 23) ;
3 . le disulfure de la L-5-sulf anyl- , (diméthyl) -
histidine (Composé 24) ;
4 . la L-5-sulfanyl-a,N,N (diméthyl) -histidine (Composé
25) ;
5 . la L-5-sulfanyl-a,N,N,N (triméthyl) -histidine
(Composé 26) ;
6 . le disulfure de la L -5-suifanyl - , ,N , ( rimé hyl)-
histidine (Composé 27) ;
7 . le disulfure de la L -5-suifanyl - , (acétyl )-
histidine (Composé 28) ;
8 . la L -5 -sulfanyl - , (acétyl) -histidine (Composé 29) ;
9 . la L -5 -sulfanylcarnosine (Composé 30) ;
10. le disulfure de 1 'iso-ovothiol A (Composé 31) ;
11. 1 'iso-ovothiol A (Composé 32) ;
12. le disulfure de la L -5-sulfanyl - ,N , (diméthyl) -
1-méthyl-histidine (Composé 33) ;
13. la L -5-sulfanyl -a,N,N,N(triméthyl) -1-méthylhistidine
(Composé 34) ;
14. la L-5 -sulfanyl - , (L-alanyl) -histidine (Composé
35) ;
15. le disulfure de la 5 -suifanyl - , (pentanoyl )-
histidine (Composé 36) .
Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on
peut citer, à titre non limitatif, les acides minéraux tels
que chlorhydrique , bromhydrique , iodhydrique, sulfurique,
tartrique, phosphorique ou avec les acides organiques tels
que les acides formique, acétique, trif luoro-acétique ,
propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique,
citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcanesulfoniques
tels que les acides méthane- suifonique,
trif luorométhane- suifonique, éthane-sulfonique, arylsulfoniques
tels que les acides benzène- et paratoluènesulfonique
.
Dans la formule (II) ci-dessus :
- par radical alkyle, il est entendu un groupement
comportant 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou cyclique,
éventuellement ramifié,
par radical alkyle substitué, il est entendu un
groupement alkyle substitué par un ou plusieurs atomes de
fluor, ou substitué par un groupement alkényle comportant
une ou plusieurs doubles liaisons carbone -carbone, ou
substitué par une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2 ou
COOH, ainsi que leurs énantiomères , et leurs
diastéréoisomères .
par radical aryle, il est entendu un groupement
phényle éventuellement fluoré ou polyfluoré, et comportant
éventuellement une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2
ou COOH
- par radical -amino-acyle , il est entendu le radical
acyle de tout aminoacide protéogénique , c'est à dire tout
aminoacide entrant dans la composition des protéines
retrouvées dans le monde végétal, animal, y compris
1'homme .
- par disulfure, il est entendu tout composé obtenu par
oxydation entre deux molécules identiques de dérivés de
type 5-sulf anylhistidine décrits dans l'invention.
Les nouveaux composés de type 5-sulfanylhistidine et
leurs dérivés répondant à la formule générale (II) , ainsi
que leurs disulfures, pourraient s'avérer être des
principes actifs nutritionnels , cosmétiques ou
médicamenteux.
Selon un cinquième aspect, l'invention a encore pour
objet un procédé B de préparation des composés de type 5 -
sulfanylhistidine et de leurs dérivés de formule générale
(II) obtenus à partir des composés de type 5-acylsulf anyl -
histidine et de leurs dérivés de formule générale (I)
décrit dans le procédé A ci-dessus, et caractérisé en ce
qu'il comprend les étapes suivantes :
1 ) Soit directement (procédé Bl) :
a ) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanylhistidine
obtenus selon l'invention dans un
solvant protique polaire par agitation à
température supérieure à 20°C en présence d'un
thiol ,
b ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme
1'Art .
2 ) Soit indirectement (procédé B2) :
a ) par hydrolyse des dérivés 5-acyl suifanyl
histidine obtenus selon l'invention dans un
solvant protique polaire par agitation à une
température supérieure à 20°C pour obtenir le
disulfure correspondant,
puis réduction du disulfure par réaction avec un
thiol
puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout
autre méthode de purification bien connue de
1'Homme de 1'Art .
Selon une mise en oeuvre particulière de ce procédé B selon
l'invention, le solvant protique polaire peut être de l'eau
ou une solution aqueuse.
Selon une autre mise en oeuvre particulière du procédé B
selon l'invention, le thiol peut être par exemple l'acide
mercaptopropionique ou le dithiotréitol , ou leurs mélanges.
Selon encore une autre mise en oeuvre particulière de ce
procédé B selon l'invention, la température pourra être
comprise entre 20 et 130°C.
Par cet aspect, la Demanderesse démontre la capacité des
composés de formule générale (I) à être des précurseurs de
composés de type 5-sulf anylhistidine et de leurs dérivés de
formule générale (II) après hydrolyse.
Selon un sixième aspect, l'invention a également pour
objet un procédé C de préparation de disulfures des 5 -
sulfanylhistidines et de leurs dérivés :
1 ) soit directement à partir des composés de type 5 -
acylsulf anyl -histidine et de leurs dérivés de formule
générale (I) caractérisé en ce qu'il comprend les étapes
suivantes :
a ) hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl -histidines de
formule générale (I) obtenus selon
l'invention dans un solvant protique polaire par
agitation à l'air et à une température supérieure à
20°C pour obtenir le disulfure correspondant,
b ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art ;
2 ) soit à partir de 5-sulfanylhistidines et de leurs
dérivés de formule générale (II) caractérisé en ce qu'il
comprend les étapes suivantes :
a ) oxydation par l'oxygène ou le diméthyl suifoxyde ou
toute autre méthode d'oxydation bien connue de
1'Homme de 1'Art ,
b ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art .
Par cet aspect, la Demanderesse démontre la capacité des
composés de type 5-acylsulfanyl -histidines de formule
générale (I) à être des précurseurs de disulfures de 5 -
suifanylhistidines et de ses dérivés après hydrolyse et
oxydation .
Selon un septième aspect, l'invention a également pour
objet un procédé D en « one-pot » de préparation des
dérivés 5-sulfanylhistidines et leurs disulfures
correspondants à partir des dérivés histidines
correspondants, en combinant les procédés A avec B ou avec
C , et caractérisé en ce qu'il comprend les étapes
suivantes :
en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou
organique, la réaction avec :
a ) un agent générateur d'ion halogénium X+ dans un
solvant protique polaire, à température comprise
entre 0-25°, puis avec
b ) un réactif soufré de type acide carbothioïque de
formule alkyle C(=0)SH ou l'un de ses sels dans un
solvant protique polaire,
suivie de
1 ) Soit :
c ) l'hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl-histidine
obtenus dans un solvant protique polaire par
agitation à température comprise entre 70 et
130°C en présence d'un thiol,
d ) puis éventuellement la purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art .
) Soit :
d ) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanylhistidine
obtenus dans un solvant protique
polaire par agitation à une température comprise
entre 70 et 130°C pour obtenir le disulfure
correspondant ,
e ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout
autre méthode de purification bien connue de
1'Homme de 1'Art .
DESCRIPTION DES FIGURES
L'invention comprend 4 Figures.
Figure 1 ; Schéma du procédé de synthèse des composés selon
la formule générale (I)
Figure 2 : Spectre représentatif (RMN-H , 400MHz) du
mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 1 , préparation de
la L-5 -acétylsulf anyl -histidine (Composé 1 )
Figure 3 : Spectre représentatif (RMN-H , 400MHz) du
mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 3 , préparation de
la L-5 -acétylsulf anyl -OÎN , (diméthyl )-histidine (Composé 2 )
Figure 4 : Spectre représentatif (RMN-H1, 400MHz) du
mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 5 , préparation de
la L-5 -acétylsulf anyl -aN, , (triméthyl) -histidine (Composé
3 )
DESCRIPTION DES EXEMPLES :
Les exemples ci-après de même que le schéma du procédé
de l'invention (voir Figure 1 ) sont fournis simplement à
titre d'illustration et ne sauraient en aucune façon
limiter la portée de l'invention.
Dans les exemples, décrits ci-après, la température est
soit la température ambiante soit une température donnée en
degré Celsius, et la pression est la pression
atmosphérique, sauf indication contraire.
Les réactifs utilisés sont disponibles commercialement
chez des fournisseurs internationaux tel que SAF (France) ,
Alfa Aesar, Fisher Scientific, TCI Europe, Bachem (Suisse,
AKOS (Allemagne) sauf les composés suivants : N-méthylhistidine
hydrochloride , N ,N-diméthyl -histidine
hydrochloride hydrate et L-hercynine qui ont été préparé
selon les protocoles cités.
Toutes les expériences sont réalisées sous atmosphère
ambiante sauf indication contraire.
Les analyses RMN-H 1 ont été enregistrées à 400 MHz ou
à 300 MHz dans le D20 ou un mélange D20/DC1, en utilisant
le signal de HOD (4.79 ppm) comme référence interne. Les
déplacements chimiques sont notés en ppm, et la
multiplicité des signaux indiqués par des symboles
suivants : s (singlet) , d (doublet) , t (triplet) , q
(quartet) , et m (multiplet) . Les constantes de couplages
sont notées en hertz (Hz) . Les analyses RMN-C 3 sont
enregistrées à 75 MHz dans le D20 ou D20/DC1 . Les analyses
de masse sont obtenues par ionisation chimique à pression
atmosphérique (APCI-MS) . Les points de fusion ont été
mesurés avec un appareil de la société Stuart Scientific.
Les analyses HPLC ont été effectuées sur un appareil
Acquity (Waters) , en utilisant deux types des colonnes : A .
colonne Kromasil Diol 250x4,6 (5pm) . La phase mobile
utilisée est un mélange du solvant A (10/90
H20/Acétonitrile + 0,05% TFA) et du solvant B (50/50
H20/Acétonitrile + 0,05% TFA) , avec un gradient variant en
10 minutes de 90% A à 100% B et un débit de 1,2 ml/min. B .
Colonne du type Thermo Hypercarb 100x4,6 (5pm) . La phase
mobile utilisée est un mélange du solvant A (100% H20 +
0,2% HCOOH) et du solvant B (100% Acétonitrile + 0,2%
HCOOH) , avec un gradient variant en 8 minutes de 100% A à
40% A et un débit de 1 ml/min. La détection s'effectue avec
un détecteur universel ELSD (Sedere) .
I - Préparation des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines en
tant que précurseurs des 5-suifanylhistidines et de leurs
disulfures
Dans le premier paragraphe sont donnés des exemples de
préparation des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines par
activât ion avec le dibrome ou le N-bromosuccinimide (NBS)
et réaction de l'intermédiaire formé avec l'acide
thioacétique .
Dans le deuxième paragraphe sont donnés des exemples
d'utilisation de ces dérivés 5-acylsulf anyl , préparés
généralement in situ, en tant que précurseur de 5 -
sulf anylhistidines et ses dérivés.
I-l. Préparation des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines par
activation avec le dibrome ou avec le N-bromosuccinimide
(NBS) et réaction avec l'acide thioacétique
Exemple 1 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-histidine
(Composé 1 ) par activation avec le dibrome et réaction avec
l'acide thioacétique
Composé 1
Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (52,93 g ;
250 oles ; 1 éq.) est dissout dans 1,5 1 d'eau
déminéralisée, puis la solution est refroidie à 0°C en 30
minutes. Sous une forte agitation, le dibrome (16,7 m l ;
51,93 g ; 325 mmoles; 1,3 éq. ) est ajouté goutte à goutte
très rapidement. La solution vire au rouge. L'acide thioacétique
(73,3 m l ; 78,46 g ; 1 mole; 4 éq.) est additionné
très rapidement : la solution se décolore immédiatement et
passe du rouge au jaune clair. L'agitation est maintenue
vigoureuse à 0°C pendant lh.
Le composé 1 est obtenu avec un rendement réactionnel de
72% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
.
RMN -H1 (D 20 pH ~1, 400 MHz) d'un échantillon du mélange: 
(ppm) = 2,57 (s, 3H) ; 3,38 (dd, J= 15,6 H z et J=6,8 Hz,
1H) ; 3,47 (dd, J=15,6 Hz, J=7,8 Hz, 1H) ; 4,34 (dd, J=7,8 H z
et J=6,8 Hz, 1H) ; 8,94 (s, 1H) .
Un singulet correspondant à l'excès d'acide thio-acétique
est détecté à 2,48 ppm, ainsi que des signaux de faible
intensité correspondants aux produits secondaires, tel que
l'acide acétique détecté à 2 ,Oppm. Un spectre représentatif
est inclus dans la Figure 2 .
LCMS (APCI) : 228,0 [M-H]
Exemple 2 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-histidine
(Composé 1 ) par activation avec le N-bromosuccinimide et
réaction ave 'acide thioacétique
Composé 1
Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (10,4 8 g ;
50 oles ; 1 éq.) est dissout dans 300 ml d'eau
déminéralisée contenant une solution d'acide chlorhydrique
concentré à 37% (4,17 ml ; 4,92 g ; 50 mmoles; 1 éq.) puis
la solution est refroidie à 0°C. L'agitation est maintenue
très forte. Le N-bromosuccinimide (11,56 g ; 65 mmoles; 1,3
éq.) est ajouté en une seule portion: le mélange devient
orange limpide après 30 secondes. La température monte à
1°C. Après 2 minutes 30 secondes, l'acide thio-acétique
(14,7 ml ; 15,69 g ; 200 mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul
coup: la décoloration intervient très rapidement. La
température monte à 4°C. Après refroidissement à 0°C,
l'agitation est maintenue vigoureuse pendant lh.
Le composé 1 est obtenu avec un rendement réactionnel de
75% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
(dans le mélange réactionnel) .
Les spectres RMN -H 1 et de masse sont identiques à ceux
obtenus dans l'exemple 1 .
Exemple 3 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-
(X, N ,N (diméthyl) -histidine (Composé 2 ) par activation avec
le N-bromosuccinimide et réaction avec l'acide thio
acétique
Composé 2
Le chlorhydrate de la a-N, (diméthyl )-histidine
monohydratée (6,06 g ; 25 oles ; 1 éq.) (voir V . N .
Reinhold et al., J . Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est
dissout dans 135 m l d'eau déminéralisée. Puis une solution
d'acide chlorhydrique concentrée à 37%, (2,1 m l ; 2,46 g ;
25 mmoles; 1 éq.) est additionnée, et la solution
résultante est refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue
très forte. Le N-bromosuccinimide (2,31 g ; 13 mmoles; 1,3
éq.) est ajouté rapidement. Après 1 minute, l'acide
thioacétique (2,94 ml, 3,14 g ; 40 mmoles; 4 éq.) est ajouté
très rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C
pendant 30 minutes.
Le composé 2 est obtenu avec un rendement réactionnel de
70% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
.
RMN -H1 (D 20 pH ~ 1 , 400 MHz) d'un échantillon du mélange: 
(ppm) = 2,57 (s, 3H) ; 2,79 (s, 6H) ; 3,42 (dd, J=14,9 H z
et J=10,6 Hz, 1H) ; 3,49 (dd, J=14 , H z et J=4 ,4 Hz, 1H) ;
4,20 (dd, J=10,6 H z et J=4 ,4 Hz, 1H) ; 8,92 (s, 1H) .
Un singulet correspondant à l'excès d'acide thioacétique
est détecté à 2,47 ppm, ainsi que des signaux de faible
intensité correspondants aux produits secondaires, tel que
l'acide acétique détecté à 2 ,Oppm. Un spectre représentatif
est inclus dans la Figure 3 .
Le composé 2 est purifié sur une colonne de silice
utilisant un gradient acétate d 'éthyle/éthanol suivi par
l'élution avec de l'eau.
RMN -H1 (D 20 pH 2-3, 300 MHz): (ppm) = 2,54 (s, 3H) ; 2,96
(S, 6H) ; 3,28 (dd, J=14,7 H z et J =10,4 Hz, 1H) ; 3,39 (dd,
J=14,7 Hz, J=4,4 Hz, 1H) ; 3,87 (dd, J=10,4 H z et J=4 ,4 Hz,
1H) ; 8,81 (S, 1H) .
Un singulet de faible intensité correspondant au produit
hydrolysé (composé 18b) est détecté à 8,33 ppm.
RMN-C 3 (D 20 , 75 MHz) : Ô(ppm) = 22,4; 30,0; 41,7; 68,4;
117,2; 134,3; 136,8; 170,9; 195,9.
LCMS (APCI) : 258,9 [M+H] +
Exemple 4 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-
(X, N ,N (dimethyl) -histidine (Composé 2 ) par activation avec
le dibrome et réaction avec l'acide thioacétique
Composé 2
Le chlorhydrate de la a , , (diméthyl) histidine monohydratée
(1,66 g ; 6,98 mmoles; 1 éq.) (voir V . N . Reinhold et al.,
J . Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est dissout dans 57 m l
d'eau déminéralisée, puis la solution est refroidit à 0°C.
Sous forte agitation, le dibrome (470 ΐ ; 1,45 g ; 9,08
mmoles; 1,3 éq.) est ajouté goutte à goutte en 3 minutes.
La solution devient rouge. Après 1 minute, l'acide
thioacétique (2,56 m l ; 2,74 g ; 34,91 mmoles; 5 éq.) est
additionné très rapidement : la solution se décolore
immédiatement et passe du rouge au jaune clair. L'agitation
est maintenue vigoureuse à 0°C pendant lh.
Le composé 2 est obtenu avec un rendement réactionnel de
69% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
.
Les spectres RMN -H1 et masse sont identiques à ceux obtenus
dans l'exemple 3 .
Exemple 5 : Préparation du la L-5-acétylsulfanyla,
N,N,N(triméthyl) -histidine (Composé 3 ) par activation
avec le N-bromosuccinimide et réaction avec l'acide
thioacétique
Composé 3
La L-hercynine (2,0 g ; 9,96 oles ; 1 éq.) (voir V . N .
Reinhold et al., J . Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est
dissoute dans 55 m l d'eau déminéralisée. Puis une solution
d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (1,66 m l ; 1,96 g ;
19,91 mmoles; 2 éq.) est ajoutée, et refroidie à 0°C. Sous
forte agitation, le N-bromosuccinimide (2,48 g (13,94
mmoles; 1,4 éq.) est ajouté : la solution devient rouge.
Après 5 minutes, l'acide thioacétique (4,4 ml (4,69 g ;
59,74 mmoles; 6 éq. ) est additionné très rapidement.
L'agitation est maintenue pendant 40 minutes.
Le composé 3 est obtenu avec un rendement réactionnel de
65% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
.
RMN -H1 (D 20 pH ~ 1 , 400 MHz) d'un échantillon du mélange: 
(ppm) : 2,53 (s, 3H) ; 3,33 (s, 9H) ; 3,50 (m, 2H) ; 4,13
(m, 1H) ; 8,91 (S, 1H) .
Deux singulets correspondant à l'excès de l'acide thio
acétique et au succinimide sont détectés à 2,44 ppm et 2,76
ppm, ainsi que des signaux de faible intensité
correspondants aux produits secondaires tel que l'acide
acétique détectée à 2,0ppm. Un spectre représentatif est
inclus dans la Figure 4 .
Le produit est purifié sur une colonne de silice (gradient
acétate d 'éthyle/éthanol/eau) .
RMN-H (D 20 , pH 2-3, 400 MHz) : (ppm) = 2,53 (s, 3H) ; 3,30
(S, 9H) ; 3,37 (m, 1H) ; 3,44 (dd, J=14 ,0 H z et J= 3,8 Hz,
1H) ; 3,88 (dd, J=ll,7 H z et J=3 ,8 Hz, 1H) ; 8,72 (s, 1H) .
RMN-C 3 (D 20 , 75 MHz) : (ppm) = 22,9; 30,0; 52,5; 76,5;
117,9; 133,1; 137,2; 169,7; 196,0.
LCMS (APCI) : 272,1 [M+H] +
Exemple 6 : Préparation du la L-5-acétylsulfanyla,
N,N,N(triméthyl) -histidine (Composé 3 ) par activation
avec le brome et réaction avec l'acide thio -acétique
Composé 3
La L-hercynine (1,0 g (5 mmoles; 1 éq.) est dissoute dans
35 ml d'eau déminéralisée. Puis une solution d'acide
chlorhydrique concentrée à 37% (417 ΐ ; 5 mmoles; 1 éq.)
est ajoutée et la solution est refroidie à 1°C. Sous forte
agitation, le dibrome (0,33 m l ; 1,03 g , 6,5 mmoles; 1,3
éq.) est ajouté : une gomme rouge se forme dans un premier
temps qui se solubilise après 3 minutes. Après 4 minutes,
l'acide thioacétique (2,20 m l ; 2,68 g ; 25 mmoles; 10 éq.)
est additionné très rapidement. L'agitation est maintenue
pendant 30 minutes.
Le composé 3 est obtenu avec un rendement réactionnel de
68% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
.
Les spectres RMN-H 1 et masse sont identiques à ceux
obtenus dans l'exemple 5 .
Exemple 7 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-
(X, N (glycinyl) -histidine (Composé 4 ) par activation avec le
N -bromosucci hioacétique
Composé 4
La , (glycinyl) -histidine (212 g , 1 ole ; 1 éq.) est
dissoute dans 7 ml d'eau déminéralisé et 1 m l
d 'acétonitrile . Puis une solution d'acide chlorhydrique
concentrée à 37% (170 ΐ , 2 mmoles; 2 éq.) est ajoutée et
la solution est refroidie à 0°C. Sous forte agitation, le
N-bromosuccinimide (230 mg, 1,3 mmoles; 1,3 éq.) est
ajouté. Après 3 minutes, l'acide thioacétique (370 ΐ , 5,0
mmoles; 5 éq.) est additionné très rapidement. L'agitation
est maintenue à 0°C pendant 30 minutes.
Le composé 4 est obtenu avec un rendement réactionnel de
62% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNRMN-
H (D 20 pH~l, 400 MHz) d'un échantillon du mélange: 
(ppm) = 2,53 (s, 3H) , 3,20 (dd, J=15,3 H z et J=8,5 Hz, 1H) ,
3,36 (dd, J=15,3 H z et J=5,7 Hz, 1H) , 3,79 (dd, J=16,4 H z
et J=10,7 Hz, 2H) ; 3,84 (m, 1H) , 8,86 (s, 1H) .
Un singulet correspondant à l'excès de l'acide thioacétique
est détecté à 2,48 ppm, un singulet à 2,78 ppm
correspondant au succinimide ainsi que des signaux de
faible intensité correspondants aux produits secondaires,
tel que l'acide acétique détecté à 2,0ppm.
LCMS (APCI) : 287,3 [M+H] +
Exemple 8 : Préparation du dérivé L-5-acétylsulfanyl-
(X, N ,N (diméthyl) -1-méthylhistidine (Composé 5 ) par
activation avec le N-bromosuccinimide et réaction avec
l'acide thioacétique .
Préparation de la a ,N ,N (diméthyl) -l-méthyl-L-histidine
La , , (diméthyl) -l-méthyl-L-histidine est préparé en
analogie avec le protocole décrit pour la ,N,N (diméthyl) -
L-histidine {V. N . Reinhold et al., J . Med. Chem. 1968, 11,
258-260) à partir de la l-méthyl-L-histidine et du
formaldéhyde par amination réductrice en présence de
palladium sur charbon actif (88%) .
RMN -H1 (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,91 (s, 6H) ; 3,18 (d,
J=6,4 Hz, 2H) ; 3,66 (s, 3H) ; 3,85 (t, J=6,4 Hz, 1H) ;
6 ,96 (S, 1H) ; 7,57 (s, 1H) .
Préparation du dérivé L-5-acétylsulfanyl-
,,(diméthyl) -1-méthyl-histidine
Composé 5
La , , (diméthyl) -1-méthyl-histidine (604 mg, 3 mmoles; 1
éq.) est dissoute dans 22 m l d'eau déminéralisée. L'acide
chlorhydrique concentrée à 37% (250 ΐ , 3 mmoles,• 1 éq.)
est ajoutée, puis la solution est refroidie à 0°C.
L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide
(700 mg, 3,9 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Après
3 minutes, l'acide thioacétique (1,1 ml, 15 mmoles; 5 éq.)
est ajouté très rapidement. L'agitation est maintenue
vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes.
Le composé 5 est obtenu avec un rendement réactionnel de
65% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNRMN-
H (D 20 pH~l, 400 MHz) d'un échantillon du mélange:
ô(ppm) = 2,58 (s, 3H) , 3,00 (s, 6H) , 3,38 (dd, J=14,9 H z et
J=10,7 Hz, 1H) , 3,46 (dd, J=14 ,9 H z et J=4 ,3 Hz, 1H) , 3,77
(s, 3H) , 4,12 (dd, J=10,7 H z et J=4 ,3 Hz, 1H) , 8.97 (s, 1H)
Un singulet correspondant à l'excès de l'acide thioacétique
est détecté à 2,48 pp , un singulet à 2,78 pp
correspondant au succinimide ainsi que des signaux de
faible intensité correspondants aux produits secondaires,
tel que l'acide acétique détecté à 2 ,Oppm.
Le produit est purifié sur une colonne de silice utilisant
un gradient acétate d 'éthyle/éthanol/eau 2/2/1 suivi par
l'élution avec un mélange d 'éthanol/eau 1/1. On obtient le
composé 5 (48%) sous forme d'une huile transparente.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,56 (s, 3H) ; 2,95 (s,
6H) ; 3,25 (dd, J=15,0 Hz et J=9,0 Hz, 1H) ; 3,31 (dd,
J=15,0 H z et J=5,4 Hz, 1H) ; 3,69 (s, 3H) ; 3,86 (dd, J=9,0
H z et J=5,4 Hz, 1H) ; 8.53 (s, 1H) .
Les signaux de 1 'éthanol sont détectés à l,18ppm et
3 ,65ppm.
LCMS (APCI) : 272,3 [M+H] +
Exemple 9 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyla,
N,N,N(triméthyl) -1-méthyl -histidine (Composé 6 ) par
activation avec le N-bromosuccinimide et réaction avec
l'acide thioacétique
Préparation de la 1-méthyl-hercynine
La 1-méthyl-hercynine est préparé en analogie avec le
protocole décrit pour l'hercynine (V. N . Reinhold et al.,
J . Med. Chem. 1968, 11, 258-260) à partir de la 1-méthyldiméthyl
-L-histidine et d 'iodométhane par quaternisation
dans le méthanol (89%) .
RMN-H 1 (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,19 (m, 2H) ; 3,28 (s,
9H) ; 3,67 (s, 3H) ; 3,89 (dd, J=10,6 H z et 4,5 Hz, 1H) ;
6 ,94 (s, 1H) ; 7,57 (s, 1H) .
Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,N(triméthyl) -
l-méthyl-histidine (Composé 6 )
La 1-méthyl-hercynine (430 g , 2 oles ; 1 éq.) est
dissoute dans 15 ml d'eau déminéralisée. L'acide
chlorhydrique concentrée à 37% (170 ΐ , 2 mmoles,• 1 éq.)
est ajouté puis la solution est refroidie à 0°C. Sous forte
agitation, le N-bromosuccinimide (465 mg, 2,6 mmoles; 1,3
éq.) est ajouté. Après 3 minutes, l'acide thioacétique (740
ΐ , 10 mmoles; 5 éq.) est additionné très rapidement.
L'agitation est maintenue à 0°C pendant 30 minutes.
Le composé 6 est obtenu avec un rendement réactionnel de
67% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNRMN-
H (D 20 pH~l, 400 MHz) d'un échantillon du mélange:
ô(ppm) = 2,57 (s, 3H) , 3,32 (s, 9H) , 3,53 (m, 2H) , 3,75 (s,
3H) , 4,08 (dd, J=ll,9 Hz et J=3,7 Hz, 1H) , 8.98 (s, 1H) .
Un singulet correspondant à l'excès de l'acide thioacétique
est détecté à 2,48 ppm, un singulet à 2,78 ppm
correspondant au succinimide ainsi que des signaux de
faible intensité correspondants aux produits secondaires,
tel que l'acide acétique détecté à 2,0ppm.
LCMS (APCI) : 286,0 [M+H] +
Exemple 10 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-a-N(Lalanyl)
-histidine (Composé 7 ) par activation avec le N -
bromosuccinimide et réaction avec l'acide thioacétique
Composé 7
L ' ,N (L-alanyl) -histidine (500 g , 2,2 oles ; 1 éq.) est
dissoute dans 15 ml d'eau déminéralisée contenant une
solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (370 ΐ ,
4,4 mmoles; 2 éq.) puis la solution est refroidie à 0°C. Le
N-bromosuccinimide (510 mg, 2,9 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté
en une portion: le mélange devient orange limpide après 30
secondes. Après 3 minutes, l'acide thioacétique (820 ΐ ,
11,0 mmoles; 5 éq.) est ajouté très rapidement. L'agitation
est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes.
Le composé 7 est obtenu avec un rendement réactionnel de
65% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
d'un échantillon.
Le mélange réactionnel est lavé avec 2x25 m l d'acétate
d'éthyle, puis le composé est purifié sur une colonne de
silice (acétate d 'éthyle/éthanol/eau 2/2/1. On obtient le
composé 7 (410 mg, 54%, pureté 88%) sous forme d'une huile
transparente .
RMN -H1 (D 20 pH acide, 400 MHz) : (ppm) = 1,49 (d, J=7,2
Hz, 3H) ; 2,53 (s, 3H) ; 3,20 (dd, J=15,3 H z et J=8,9 Hz,
1H) ; 3.36 (dd, J = 15,3 Hz et J=5,8 Hz, 1H) , 4,01 (q,
J=7,2 Hz, 1H) ; 4,77 (m superposé avec signal HOD) ; 8,86
(s, 1H) .
Un singulet correspondant au succinimide est détecté à 2,68
ppm.
LCMS (APCI) : 301,1 [M+H] +
Exemple 11 : Préparation du dérivé 5-acétylsulfanyl-
,N (pentanoyl) -histidine (Composé 8 ) par activation avec le
N-bromosuccinimide et réaction avec l'acide thioacétique
Composé 8
L ' , (pentanoyl )-histidine (450 g , 1,43 oles ; 1 éq.) est
dissoute dans 10 ml d'eau déminéralisée contenant une
solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (120 ΐ ,
1,43 mmoles; 1 éq.) , puis la solution est refroidie à 0°C.
L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide
(330 mg, 1,86 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté. Après 3 minutes,
l'acide thioacétique (530 ΐ , 7,15 mmoles; 5 éq.) est
ajouté très rapidement. L'agitation est maintenue
vigoureusement à 0°C pendant 30 minutes.
Le composé 8 est obtenu avec un rendement réactionnel de
67% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH
d'un échantillon.
Le produit est purifié sur une colonne de silice (mélange
90% d'acétate d 'éthyle/éthanol 3/1 et 10% d'eau) . La 5 -
acétylsulf anyl- , (pentanoyl) -histidine (composé 8) est
obtenu sous forme d'une huile transparente (32 0 mg, 64%,
pureté 90%) .
RMN -H1 (D 20 ~1, 400 MHz) : (ppm) = 0,85 (t, J=7,3 Hz,
3H) ; 1,17 (h, J=7,4 Hz, 2H) ; 1,47 (p, J=7,4 Hz, 2H) ;
2,22 (t, J=7,4 Hz, 2H) ; 2,55 (s, 3H) ; 3,17 (dd, J=15,2 H z
et J=9,6 Hz, 1H) ; 3,37 (dd, J=15,2 Hz et J=5,2 Hz, 1H) ;
4,79 (m superposé au signal de HOD) ; 8,88 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 314,1 [M+H] +
Pour illustrer l'invention, les composés 9-17 sont préparés
(Exemples 12-21) en analogie avec les exemples précédents.
Les résultats ainsi que les caractéristiques spectrales
sont résumés dans le Tableau 1 ci-dessous.
Tableau 1 ; Exemples 12-21 décrivant la préparation des
Composés 9-17 selon l'invention.
II. Exemples d'application ;
II .1 Transformation des dérivés 5-acylsulfanyl
5 préparés in situ en dérivés 5-sulfanylhistidines
correspondants par hydrolyse
Pour illustrer l'application des dérivés 5 -
acylsulf anyl -histidines selon l'invention, d'une manière
non- limitative, sont donnés, dans ce paragraphe, des
10 exemples d'application des nouveaux dérivés 5-acylsulf anyl -
histidines, préparés généralement in situ, en tant que
précurseur de 5-sulf anylhistidines et de leurs dérivés.
Ces exemples illustrent l'utilité des nouveaux dérivés
15 5-acylsulf anyles décrits dans l'invention pour préparer
d'une manière aisée des composés 5-suifanylhistidines et
leurs dérivés tels que les disulfures, qui sont par
ailleurs très difficile d'accès et nécessitent des
synthèses multi -étapes .
20
Afin d'obtenir de meilleurs rendements en dérivés 5 -
sulf anylhistidines , les composés 5-acylsulf anyl sont
préparés in situ puis hydrolysés ensuite directement, en
agitant le milieu réactionnel, de préférence en chauffant
25 le milieu réactionnel. La présence d'un thiol, tel que
l'acide mercaptopropionique ou la dithiothréitol , s'avère
bénéfique pour l'isolation aisée des dérivés de 5 -
sulf anylhistidines , mais elle n'est aucunement nécessaire
pour l'hydrolyse même, comme démontré dans les exemples de
30 suivi 18d, 19b et 19c.
Exemple 22 : Préparation « one pot » de la L-5-
sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5 -
acétylsulf anylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 18)
Composé 18
Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (10,4 8 g ;
50 oles ; 1 éq.) est dissout dans 300 m l d'eau
déminéralisée et l'acide chlorhydrique concentré à 37%
(4,17 m l ; 4,92 g ; 50 mmoles; 1 éq.), puis la solution est
refroidie à 0°C. L'agitation est maintenue très forte. Le
N-bromosuccinimide (11,56 g ; 65 mmoles; 1,3 éq.) est
ajouté en une seule portion: le mélange devient orange
limpide. L'acide thio-acétique (14,7 m l ; 15,69 g ; 200
mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul coup. L'agitation est
maintenue vigoureuse à 0°C pendant lh. L'acide 3 -
mercaptopropionique (26 m l ; 32,2 g ; 300 mmoles; 6 éq.) est
ajouté puis la solution légèrement jaune est chauffée à
90°C pendant 18h. La solution est extraite par trois fois
300 m l d'acétate d'éthyle. Après neutralisation et
cristallisation en présence de dithiothréitol (231 mg ; 1,5
mmoles; 0,03 éq.), le composé désiré 18 cristallise. Le
solide est filtré et séché sous vide pour donner 2,97 g
(31% ; 41% par rapport à la quantité de l'intermédiaire
SAc) de L-5-sulf anylhistidine (Composé 18) sous forme d'un
solide blanc cassé.
RMN-H (D 20 , 400 MHz): (ppm) = 3,18 (dd, J= 15,8 Hz,
J=7,3 Hz, 1H) ; 3,26 (dd, J=15,8 H z et J=5,l Hz, 1H) ; 4,33
(dd, J=7,3 Hz, J=5,l Hz, 1H) ; 8,25 (s, 1H) .
RMN-H 1 (D 20+DC1, 400 MHz): (ppm) = 3,11 (dd, J= 15,1 Hz,
J=6,5 Hz, 1H) ; 3,19 (dd, J=15,l H z et J=6,6 Hz, 1H) ; 4,12
(t, J=7,0 Hz, 1H) ; 8,37 (s, 1H) .
RMN-C 13 (D 20+DC1, 75 MHz): (ppm) = 26,3; 55,2, 122,1;
130,1; 135,5; 173,6.
LC-MS (AP-) : 186,0 [M-H]
[ ] D : + 7,4° (c = 0,1 ; IN HC1)
Analyse élémentaire : C H 302S ; Théorique : C 38,49 % ; H
4,84 % N 22,44 ; Mesuré : C 38,0 % ; H 4 , 6 % ; N 22,06.
Exemple 23 : Préparation « one pot » de la D-5-
sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5 -
acétylsulf anyl-histidine suivi par hydrolyse (Composé 19)
Composé 19
La D-histidine (3,92 g ; 25 mmoles; 1 éq.) est dissoute
dans 150 m l d'eau déminéralisée et une solution d'acide
chlorhydrique concentrée à 37% (4,17 ml ; 4,92 g ; 50
mmoles; 2 éq.), puis la solution est refroidie à 0°C.
L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide
(5,78 g (32,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté d'un coup: la
solution devient orange limpide. L'acide thioacétique (7,33
m l ; 7,85 g ; 200 mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul coup.
L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant lh.
L'acide 3-mercaptopropionique (13 m l (16,1 g ; 150 mmoles; 6
éq.) est ajouté puis la solution est chauffée à 100°C
pendant 18h. Après refroidissement, la solution est
extraite par trois fois 150 m l d'acétate d'éthyle. Le
dithiothréitol (13 m l ; 16,1 g ; 150 mmoles; 6 éq.) est
ajouté à la phase aqueuse. Après recristallisation en
présence de charbon actif on obtient 1,25 g de D-5-
sulf anylhistidine (Composé 19) (26 % ; 35 % par rapport à
la quantité de l'intermédiaire SAc) sous forme d'un solide
beige.
Les spectres RMN-H , RMN-C 3 et masse sont identiques à
ceux obtenus dans l'exemple 13 pour le composé 9 .
[ ] D : - 7,1° (c = 0,1 ; IN HC1)
Exemple 24 : Préparation « one pot » de la D,L-5-
sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5 -
acylsulf anylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 20)
Composé 20
Le chlorhydrate de la DL-histidine monohydratée (3,21 g ;
15 mmoles; 1 éq.) est dissout dans 100 ml d'eau
déminéralisée et une solution d'acide chlorhydrique
concentrée à 37% (1,25 ml ; 1,48 g ; 15 mmoles; 1 éq.), puis
la solution est refroidie à 0°C. Sous agitation très forte,
le N-bromosuccinimide (3,47 g ; 19,5 mmoles; 1,3 éq.) est
ajouté d'un coup. Après 2 minutes, l'acide thioacétique
(4,4 ml ; 4,71 g ; 60 mmoles,• 4 éq.) est ajouté d'un seul
coup. On laisse agiter à 0°C pendant lh. L'acide 3 -
mercaptopropionique (8,0 ml ; 9,65 g ; 90 mmoles; 6 éq.) est
ajouté puis la solution est chauffée à 100°C pendant 18h.
Un précipité correspondant au disulfure de l'acide thioacétique
et de l'acide mercaptopropionique est éliminé par
filtration. Le filtrat est lavé par deux fois 100 ml
d'acétate d'éthyle. Après neutralisation et cristallisation
en présence de dithiothréitol (233 g ; 1,5 mmoles; 0,1
éq.) , 650 mg de D ,L-5-sulf anylhistidine (Composé 20) (23 % ,
29 % par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) sont
obtenus sous forme d'un solide blanc.
Les spectres RMN-H , RMN-C 3 et masse sont identiques à ceux
obtenus dans l'exemple 22 pour le composé 18.
I .2 Transformation des dérivés 5-acylsulfanyles
préparés in situ en dérivés 5 ,5 ' -disulfane-diyl-bishistidines
(disulfures) correspondants par hydrolyse
Exemple 25 : Préparation « one pot » du disulfure de la L -
5-suifanylhistidine via préparation in-situ de la 5 -
acylsulf anylhistidine suivi par hydrolyse et oxydation
(Composé 21)
Composé 21x4HClx2H 20
Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (14,82 g ;
70 mmoles; 1 éq.) est dissout dans 126 ml d'eau
déminéralisée, puis la solution est refroidie à 0°C. Sous
forte agitation, le dibrome (4,32 ml ; 13,42 g ; 84 mmoles;
1,2 éq.) est ajouté goutte à goutte très rapidement. La
solution devient rouge. L'acide thioacétique (18,0 ml ;
19,2 g ; 245 mmoles; 3,5 éq.) est additionné très
rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C
pendant 20 minutes. L'acide 3-mercaptopropionique (25 ml ;
29,71 g ; 280 mmoles; 4 éq.) est ajouté et la solution est
chauffée à 80°C pendant la nuit. La solution est refroidie
puis extraite par 3 fois 150ml d'acétate d'éthyle. Après
oxydation avec une solution d'eau oxygénée à 30% (3,5 m l
(3,97 g ; 35 mmoles; 0,5 éq.) , suivie d'une purification sur
la résine Dowex WX2 , le disulfure de la L-5-
sulf anylhistidine (Composé 21) (4,66 g ; 24 % ; 37 % par
rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) chlorhydrate
hydraté est obtenu sous forme d'une poudre gris clair.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,27 (m, 2xlH) ; 3,32 (m,
2xlH) ; 4,17 (dd, J=8,0 Hz, J=6,6 Hz, 2xlH) ; 8,87 (s,
2xlH) .
LCMS (APCI) : 373,0 [M+H] +
[ ] D : + 23,6° (c = 0,1 ; IN HC1)
Exemple 26 :
Préparation « one pot » du disulfure de la L-5-sulfanyl-
(X, N (méthyl) -histidine (Composé 22) via préparation ins
tu de la 5-acylsulf anylhistidine suivi par hydrolyse
et oxydation (Composé 22)
Composé 22
Le chlorhydrate de la , (méthyl) -L-histidine (1,05 g ; 5
mmoles; 1 éq.) {V. N . Reinhold et al., J . Med. Chem. 1968,
11, 258-260) est dissout dans 35 m l d'eau déminéralisée
contenant une solution d'acide chlorhydrique concentrée à
37% ; 420 ΐ (5 mmoles; 1 éq.) , puis la solution est
refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue très forte. Le
N-bromosuccinimide (1,17 g ; 6,5 mmoles; 1,3 éq.) est
ajouté rapidement. Puis l'acide thioacétique (2,57 ml (2,74
g ; 35 mmoles; 7 éq.) est ajouté très rapidement.
L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 30
minutes. La solution est extraite avec 40 m l d'acétate
d'éthyle puis l'acide 3-mercaptopropionique (2,2 m l ; 2,65
g ; 25 mmoles; 5 éq.) est ajouté à la phase aqueuse.
L'hydrolyse est effectuée par chauffage à 100°C pendant
20h. Après refroidissement de la solution, le milieu
réactionnel est extrait par 4 fois 35 m l d'acétate
d'éthyle. Après oxydation et purification sur la résine
DOWEX 50WX2-400, le disulfure de la L-5-sulf anyl-
, (méthyl) -histidine (Composé 22) est obtenu (620 mg, 61%,
75% par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est
obtenu sous forme d'une poudre marron.
RMN-H (MeOD/D 20 20/1, 400 MHz) : (ppm) = 2,69 (s, 2x3H) ;
2,94 (dd, J=14,0 Hz, J=7,0 Hz, 2xlH) ; 2,99 (dd, J=14,0 Hz,
J=5,0 Hz, 2xlH) ; 3,92 (dd, J=7,0 Hz, J=5 ,0 Hz, 2xlH) ;
7,79 (S, 2xlH) .
LCMS (APCI) : 401,0 [M+H] +
Préparation de la L-5-sulfanyl-a,N(méthyl) -histidine par
réduction du disulfure (Composé 23)
Le disulfure de la L-5 -suif anyl - , (méthyl )- histidine (620
mg ; 1,52 mmoles, 1 éq.) (Composé 22) est mis en solution
dans 50 m l d'eau. Le dithiothréitol (473 mg ; 3,03 mmoles;
2 éq.) et le charbon actif (3 00 mg) sont ajoutés. Le
mélange est agité 4h à température ambiante. Après
filtration et cristallisation dans l'éthanol absolu la L-5-
sulfanyl- , (méthyl) -histidine (Composé 23) (351 mg, 56%)
est obtenue sous forme d'une poudre beige.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,80 (s, 3H) ; 3,21 (dd,
J=15,9 Hz, J=6,4 Hz, 1H) ; 3,28 (dd, J=15,9 Hz, J=5,2 Hz,
1H) ; 3,92 (m, 1H) ; 8,25 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 202,1 [M+H] +
Exemple 27 :
Préparation « one pot » du disulfure de la L-5-sulfanyl-
( N ,N (diméthyl) -histidine via préparation in-situ de la
5-acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse et
oxydation (Composé 24)
HCI HCI
Composé 24x4HClxH 20
Le chlorhydrate de la , (diméthyl )-histidine monohydratée
(2,43 g ; 10 mmoles; 1 éq. ) est dissout dans 54 m l d'eau
déminéralisée contenant une solution d'acide chlorhydrique
concentrée à 37% (835 ΐ ; 985 mg; 10 mmoles; 1 éq.) , puis
la solution est refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue
très forte. Le N-bromosuccinimide (2,31 g ; 13 mmoles; 1,3
éq.) est ajouté rapidement. Après 2 minutes, l'acide thioacétique
(3,0 ml ; 3,14 g ; 40 mmoles; 4 éq.) est ajouté
très rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C
pendant 30 minutes. La solution légèrement jaune obtenue
est extraite par 2 fois 120 m l d'acétate d'éthyle. Après
hydrolyse à chaud, oxydation et purification sur la résine
DOWEX 50WX2-400 le chlorhydrate hydrate du disulfure de la
L-5-sulfanyl-aN,N (diméthyl) -histidine (Composé 24x4HClxH20,
1,2 g , 41 % ) est obtenu sous forme d'une poudre beige.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,01 (s, 2x6H) ; 3,37 (dd,
J=14,6 Hz, J=ll,2 Hz, 2xlH) ; 3,51 (dd, J=14,6 Hz, J=4 ,0
Hz, 2xlH) ; 4,09 (dd, J=ll,2 Hz, J=4 ,0 Hz, 2xlH) ; 8,86
(S, 2xlH) .
LCMS (APCI) : 429,2 [M+H] +
HCI HCI
Composé 24
Le chlorhydrate hydrate du disulfure de la L-5-sulfanyl-
,N ,N (diméthyl) -histidine (3,6 g ; 5,89 mmoles; 1 éq.) est
mis en solution dans 53 m l d'eau déminéralisée. La résine
Amberlite ® IRA-410 (8g) sous forme hydrogénocarbonate (selon
K . A . Piez et al., J . Biol . Chem. 194, 669-672 (1952)) est
ajoutée. La suspension est agitée sous vide pendant 30
minutes puis filtrée. Le filtrat est évaporé pour conduire
au disulfure de la L-5-sulfanyl-a,N,N (diméthyl) -histidine
base libre (Composé 24) (2,47 g , 84%) sous forme d'un
solide jaune.
RMN-H 1 (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,88 (s, 2x6H) ; 2,92 (m,
2x2H) ; 3,70 (m, 2xlH) ; 8,17 (s, 2xlH) .
Obtention du composé 25 par réduction du Composé
HCI HCI
Composé 25
Le chlorhydrate hydraté du disulfure de la L-5-sulfanyl-
,N ,N (diméthyl) -histidine (1,2 g ; 2,07 oles ; 0,5 éq.)
est mis en solution dans 40 m l d'eau déminéralisée. La
résine Amberlite ® IRA-410 (2 g ) sous forme
hydrogénocarbonate est ajoutée. La suspension est agitée
sous vide pendant 30 minutes puis filtrée. Après réduction
avec du dithiothréitol (967 mg ; 6,20 mmoles; 1,5 éq.) et
cristallisation avec l'éthanol absolu, sous azote, la L-5-
sulf anyl -a, , (diméthyl )-histidine (Composé 25) (450 mg, 58
% ) est obtenue sous forme d'un solide blanc.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,00 (s, 6H) ; 3,23 (dd,
J=15,5 H z et J=7,5 Hz, 1H) ; 3,31 (dd, J=15,5 H z et J=5,8
Hz, 1H) ; 4,00 (dd, J=7,5 Hz et J=5,8 Hz, 1H) ; 8,28 (s,
1H) .
RMN-C 3 (D 20 , 75 MHz) : (ppm) = 22,7; 41,8, 67,3; 124,5;
129,6; 131,7; 171,0.
LCMS (APCI) : 216,1 [M+H] +
Suivi analytique de l'hydrolyse du composé 5 -
acylsulfanyl (composé 2 ) en composé 5 -
Composé 25
Le composé 2 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 3 , utilisant un gradient acétate
d 'éthyle/éthanol suivi par l'élution avec de l'eau. La
fraction aqueuse contenant le composé 2 pur est placée dans
un bain d'eau à 40°C, et chauffé sous agitation pendant 8h.
Des échantillons sont prélevés toutes les 60 minutes, et le
mélange analysé par HPLC.
L'hydrolyse du composé 2 est quasi -complète après 8h, et le
composé 19 est obtenu avec un rendement de 70%.
Tableau 2 : Suivi de la formation du composé 25 par
hydrolyse du composé 2 :
Exemple 28 :
Préparation « one pot » de la L-5-sulfanyla,
N,N,N(triméthyl) -histidine via préparation in-situ
de la 5-acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse
(Composé 26)
Composé 26
La L-hercynine (5,02 g ; 25 mmoles; 1 éq.) est dissoute
dans 135 ml d'eau déminéralisée et une solution d'acide
chlorhydrique concentrée à 37%, (4,17 ml ; 4,93 g ; 50
mmoles; 2 éq.) est additionnée ; puis la solution est
refroidie à 0°C. Sous forte agitation, le N -
bromosuccinimide (5,78 g ; 32,5 mmoles; 1,3 éq.) est
ajouté. Après 5 minutes, l'acide thio-acétique (18,33 m l ;
19,61 g ; 250 mmoles; 10 éq.) est additionné très
rapidement. L'agitation est maintenue pendant 40 minutes.
La solution est extraite par 2 fois 135 m l d'acétate
d'éthyle. L'acide 3-mercaptopropionique (11,07 m l ; 13,4 g ;
125 mmoles; 5 éq. ) est ajouté à la phase aqueuse puis la
solution est chauffée à 130°C pendant 3h. Après extraction,
neutralisation et cristallisation en présence de
dithiothréitol (1,95 g (12,5 mmoles; 0,5 éq.) la L-5-
sulf anyl - , , , (triméthyl )-histidine (Composé 26) (2,22
g ; 38 % ; 58 % par rapport à la quantité de
l'intermédiaire SAc) est obtenu sous forme d'une poudre
blanche (à conserver sous atmosphère inerte) .
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,29 (s, 9H) ; 3,19 (m,
1H) ; 3,35 (m, 1H) ; 4,00 (dd, J=10,6 Hz, J=3,9 Hz, 1H) ;
8,22 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 230,0 [M+H] +
Suivi analytique par RMN-H1 de l'hydrolyse du composé 5 -
acylsulfanyl 3 en composé L -5-suifanyl -
aN,N,N( triméthyl) -histidine (Composé 26) en présence
d'un thiol
Composé 26
Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 5 . 100 mg (0,33 mmoles, 1 éq) du
composé 3 sont solubilisés dans 2,4 mL de D20. 172 mg de
l'acide 3-mercaptopropionique (142 ΐ , 5 équivalents) sont
ajoutés, et la solution est chauffée à 40°C. La conversion
est suivie par RMN-H et par HPLC-ELSD. Le rendement
d'hydrolyse du composé 3 est de 90% après 3h (suivi par
RMN-H 1). Le composé 26 est formé après 3h3 0 avec un
rendement de 97% (HPLC-ELSD) .
Préparation du composé L-5-sulfanyl-a,N,N,N(triméthyl) -
histidine (composé 26) par hydrolyse du composé 5 -
acylsulfanyl 3
Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 5 . 170 mg (0,6 mmoles) du composé 3
sont solubilisé dans 10 mL d'eau, et la solution est
chauffée à 90°C à l'air pendant 7h. La conversion est
suivie par HPLC. L'hydrolyse du composé 3 est complète
après 7h. La solution est évaporée à sec. Le résidu est
repris dans un mélange de 5 mL de méthanol et 93 mg (0,6
mmol) de dithiothréitol . Après agitation pendant 4h sous
atmosphère inerte, 2mL d'éthanol sont ajoutés. Un précipité
se forme immédiatement, qui est filtré et lavé avec de
l'éthanol (2x2mL) puis de l'éther éthylique (2x2mL) . Après
séchage, 104mg (72%) de la L-5-sulfanyl-aN,N,N (triméthyl) -
histidine sont obtenus sous forme d'une poudre beige.
Les spectres RMN-H 1 et de masse sont identiques à ceux
obtenus dans l'exemple 28a.
préparation du disulfure de la L-5-sulfanyl-
-histidine (Composé 27)
La L-5-sulfanyl-a,N,N,N (triméthyl) -histidine (Composé 26,
300 mg, 1,29 mmoles, 1 éq) est mis en solution dans 50 m l
d'eau déminéralisée. La solution incolore est agitée à
température ambiante pendant 4 jours. Après filtration et
lyophilisation du filtrat, le disulfure de la L-5-sulfanyl-
,,, (triméthyl) -histidine (Composé 27) (263 mg ; 89%)
est obtenu sous forme d'une poudre jaune.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,68 (dd, J=13,5 Hz,
J=11,0 Hz, 2xlH) ; 2,75 (dd, J=13,5 Hz, J=4 ,3 Hz,
2xlH) ; 3,19 (s, 2x9H) ; 3,68 (dd, J=11,0 Hz, J=4 ,3 Hz,
2xlH) ; 7,97 (s, 2xlH) .
LCMS (APCI) : 457,1 [M+H] + .
Suivi analytique par HPLC de l'hydrolyse du composé 5 -
Composé 27
Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 5 , utilisant un gradient acétate
d 'éthyle/éthanol suivi par l'élution avec de l'eau. La
fraction aqueuse contenant le composé 3 pur est placée dans
un bain d'eau à 40°C, et chauffé sous agitation pendant
deux jours. Des échantillons sont prélevés chaque heure, et
le mélange analysé par HPLC.
L'hydrolyse du composé 3 est quasi-complète après 2 jours,
et le composé 27 est obtenu avec un rendement de 80%.
Tableau 3 : Suivi de l'hydrolyse du composé 3 :
ivi analytique de l'hydrolyse par RMN-H1 du composé 5
Composé 3 Composé 27
Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 5 . 30 mg du composé 3 sont solubilisé
dans 600pL de D20 , la solution transféré dans un tube RMN,
qui est gardé à température ambiante. La conversion est
suivie par RMN-H 1. L'hydrolyse du composé 3 est quasi -
complète après 2 jours, et on obtient un mélange contenant
le disulfure 27 et le thiol 26 (~ 3 :1) .
Tableau 4 : Suivi de l'hydrolyse du composé 3 :
Exemple 29 :
Préparation « one-pot » du disulfure de la L-5-sulfanyl
,N (acétyl) -histidine (Composé 28 chlorhydrate) via
préparation in-situ de la 5-acylsulf anylhistidine
suivi par hydrolyse et oxydation
Composé 28x2HCl
La , (acétyl) -L-histidine monohydratée (2,15 g , 10 mmoles;
1 éq.) est dissoute dans 63 m l d'eau déminéralisée
contenant l'acide chlorhydrique concentré à 37% (1,67 ml,
1,97 g ; 20 mmoles; 2 éq.) ; puis la solution est refroidie
à 0°C. Le dibrome (668 ΐ , 2,07 g ; 13 mmoles; 1,3 éq.) est
additionné. L'acide thioacétique (3,67 ml ; 3,92 g ; 50
mmoles; 5 éq.) est ajouté d'un seul coup. L'agitation est
maintenue à 0°C pendant 45 minutes. La solution est
réchauffée à température ambiante. L'acide 3 -
mercaptopropionique (5,26 ml, 6,36 g ; 60 mmoles; 6 éq.) est
ajouté puis la solution est chauffée à 80°C pendant la
nuit. La solution est refroidie à température ambiante puis
extraite par 4 fois 50 ml d'acétate d'éthyle. La phase
aqueuse est purifiée sur silice pour conduire au
chlorhydrate du disulfure de la L-5-sulf anyl- (acétyl) -
histidine (composé 28) sous forme d'une huile orange (520
mg, 17% ; 36% par rapport à la quantité de l'intermédiaire
SAc) .
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 1,86 (s, 2x3H) ; 2,92 (dd,
J=15,0 Hz, J=8,0 Hz, 2xlH) ; 3,03 (dd, J=15,0 Hz, J=5,5 Hz,
2xlH) ; 4,47 (dd, J=8,0 Hz, J=5,5 Hz, 2xlH) ; 8,73 (s,
2xlH) .
LCMS (APCI) : 457,4 [M+H] +
Préparation de la L-5-sulfanyl-a,N(acétyl) -histidine
(Composé 29)
Composé 29
Le chlorhydrate du disulfure de la L-5-sulf anyl-
, (acétyl) -histidine (Composé 28) (520 mg ; 834 pmoles, 1
éq.) est mis en solution dans 50ml d'eau puis le pH de la
solution de couleur marron est ajusté à 4,5 par ajout de
NH4OH. L'acide 3-mercaptopropionique (4,38 ml ; 5,31 g ; 50
mmoles; 5 éq.) est ajouté. La solution est chauffée à 70 °C
pendant 2h. La solution est extraite par 4 fois 50 m l
d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est évaporée à sec
pour donner la L-5-sulfanyl-a,N (acétyl) -histidine (Composé
29) (390 mg ; 86 % ) sous forme d'un solide beige.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 1,97 (s, 3H) ; 3,01 (dd
J=15,2 Hz, J=8,6 Hz, 1H) ; 3,16 (dd, J=15,2 Hz, J=4 ,8 Hz
1H) ; 4,50 (dd, J=8,6 Hz, J=4 ,8 Hz, 1H) ; 8,22 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 230,0 [M+H] +
Exemple 30 : Préparation « one pot » de la L-5-
suifanylcarnosine via préparation in-situ de la 5 -
acylsulf anylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 30)
Composé 30
La L-carnosine (425 g ; 1,88 oles ; 1 éq.) est dissoute
dans 12 ml d'eau déminéralisée contenant une solution
d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (370 mg ; 3,75
mmoles; 2 éq.), puis la solution est refroidie à 0°C. Le N -
bromosuccinimide (440 mg ; 2,44 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté
en une portion: la solution devient orange limpide. L'acide
thioacétique (960 ΐ ; 1,03 g , 13,14 mmoles; 7 éq.) est
ajouté. Le mélange est agité à 0°C pendant lh. La solution
est extraite par 4 fois 12 m l d'acétate d'éthyle. Après
neutralisation et purification sur silice en présence de
dithiothréitol (290 mg ; 1,88 mmoles; 1 éq.) , la L-5-
sulf anylcarnosine (Composé 30) (70 mg ; 14 % ; 22 % par
rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est obtenue
sous forme d'une laque incolore.
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,69 (t, J=6,7 Hz, 2H) ;
3,00 (m, 1H) ; 3,12 (m, 1H) ; 3,23 (t, J=6,7 Hz, 2H) ; 4,43
(dd, J=8,5 Hz, J=4,2 Hz, 1H) ; 8,20 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 259,1 [M+H] +
Exemple 31 : Préparation des composés 31 et 32
Préparation « one pot » du disulfure de l 'iso-ovothiol A
via préparation in-situ de la 5-acetylsulfanyl-lméthyl-
histidine suivi par hydrolyse et oxydation
(Composé 31)
Composé 31
La 1-méthyl-L-histidine (0,84 g ; 5 oles ; 1 éq.) est
dissoute dans 35 m l d'eau déminéralisée et une solution
d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (835 ΐ (10 mmoles;
2 éq.) est ajoutée ; puis la solution est refroidie à 1°C.
L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide
(1,17 g ; 6,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Après
3 minutes, l'acide thioacétique (2,57 m l ; 2,74 g ; 35
mmoles; 7 éq.) est ajouté très rapidement. L'agitation est
maintenue vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes. La solution
est extraite avec 40 m l d'acétate d'éthyle puis l'acide 3 -
mercaptopropionique (2,2 m l ; 2,65 g ; 25 mmoles; 5 éq.) est
ajouté à la phase aqueuse. L'hydrolyse est effectuée par
chauffage à 100°C pendant 20h. Après refroidissement de la
solution, le milieu réactionnel est extrait par 4 fois 35
m l d'acétate d'éthyle. Après oxydation et purification avec
la résine DOWEX 50WX2-400, le disulfure de la L -1-méthyl -L-
5-sulf anylhistidine (Composé 31) (740 mg, 65%, 90 % par
rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est obtenu
sous forme d'une poudre marron.
RMN-H (D 20+DC1, 400 MHz) : (ppm) = 3,14 (m, 2x2H)
(S, 2x3H) ; 4,17 (m, 2xlH) ; 8,89 (s, 2xlH) .
LCMS (APCI) : 401,1 [M+H] +
Pré aration de l 'iso-ovothiol A (Composé 32)
Composé 32
Le disulfure de la L-5-sulf anyl-l-méthyl-histidine (Composé
25) (427 g ; 0,52 oles , 1 éq.) est mis en suspension
dans 25 m l de méthanol . Le milieu est chauffé à 50°C puis
le dithiothréitol (2 99 mg ; 1,92 mmoles,• 2 éq.) est ajouté.
Après agitation pendant lh à température ambiante et
précipitation avec de l'éther éthylique, la L-5-sulfanyl-lméthyl
-histidine (Iso-ovothiol A , Composé 32) (295 mg ;
69%) est obtenue sous forme d'une poudre légèrement
grisâtre .
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,19 (dd, J=15,7 Hz, J=7,2
Hz, 1H) ; 3,29 (dd, J=15,7 Hz, J=5,2 Hz, 1H) ; 3,66 (s,
3H) ; 4,09 (dd, J=7,l Hz, J=5 ,2 Hz, 1H) ; 8,33 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 202,1 [M+H] +
Exemple 32 : Préparation du disulfure de la L-5-sulfanyl-
(X, N ,N (diméthyl) -1-méthyl-histidine via hydrolyse du dérivé
5-acetylsulfanyl-a,N,N(diméthyl) -1-méthyl-histidine suivi
par oxydation à l'air (Composé 33)
Composé 33
Le composé 5 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 8 . 180 mg (0,63 mmoles, 1 éq.) du
composé 5 sont solubilisés dans 20 ml d'eau. La solution
limpide est agitée en présence de l'oxygène pendant 20h à
température ambiante. Après lyophilisation, le disulfure de
la L-5-sulfanyl-a,N,N (diméthyl) -1-méthyl-histidine (Composé
33, 98%) est obtenu sous forme d'un solide amorphe
verdâtre .
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 2,97 (s, 2x6H) ; 3,17 (m,
2xlH) ; 3,28 (dd, J=15,8 Hz et J=4 ,3 Hz, 2xlH) ; 3,69 (s,
2x3H) ; 4,00 (m, 2xlH) ; 8,44 (s, 2xlH) .
LCMS (APCI) : 457,2 [M+H] + .
Exemple 33 : Préparation « one pot » du disulfure de la L -
5-sulfanyl-a,N,N,N(triméthyl) -1-méthyl-histidine (Composé
34 dichlorhydrate) via préparation in-situ de la L-5-
acétylsulfanyl-aN,N,N(triméthyl) -1-méthyl-histidine suivi
par hydrolyse et oxydation
Composé 34x2HCl
La 1-méthyl-hercynine (510 mg, 2 mmoles; 1 éq.) est
dissoute dans 15 ml d'eau déminéralisée contenant une
solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (170 ΐ , 2
mmoles; 1 éq.) , puis la solution est refroidie à 0°C.
L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide
(465 mg, 2,6 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Après
3 minutes, l'acide thioacétique (740 ΐ , 10 mmoles; 5 éq.)
est ajouté très rapidement. L'agitation est maintenue
vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes. Le mélange est extrait
avec 2x20 m l d'acétate d'éthyle puis diluée dans 160 m l
d'un mélange acétate d 'éthyle/éthanol (3/1) pour
purification sur une colonne de silice (acétate
d 'éthyle/éthanol/eau 2/2/1) . L'huile légèrement rose obtenu
est oxydé avec le diméthyle suif oxyde (14 0 ΐ , 2 mmoles, 1
éq.) dans une solution d'acide acétique glacial. La
solution est chauffée pendant une heure à 80°C. Le
dichlorhydrate du disulfure de la L-5-sulf anyl-
,,, (triméthyl) -1-méthyl-histidine (composé 34) est
obtenu après purification sur colonne de silice (acétate
d 'éthyle/éthanol/eau 2/2/1 puis élution par l'acide
chlorhydrique 0 ,5 ) sous forme d'une huile légèrement
jaune (110 mg , 10%) .
RMN-H (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 3,30 (s, 2x9H) ; 3,61 (dd,
J=14 ,1 H z et 3,4 Hz, 2xlH) ; 3,72 (m, 2xlH) ; 3,73 (s,
2x3H) 4,09 (dd, J=12,2 Hz et 3,4 Hz, 2xlH) ; 8,98 (s,
2xlH) .
LCMS (APCI) : 485,1 [M+H] +
Exemple 34 : Préparation du dérivé L-5-sulfanyl-a,N(Lalanyl)
-histidine (Composé 35) par hydrolyse du composé 5 -
acylsulf anyl
Composé 35
Le composé 7 est préparé et purifié par colonne comme
décrit dans l'exemple 10. 340 mg (1 mmoles, 1 éq.) du
composé 7 sont solubilisés dans 20 ml d'eau. La solution
limpide est agitée à l'abri de l'oxygène pendant 6 jours à
température ambiante. Après évaporât ion à sec, la L-5-
sulf anyl - , (L-alanyl )-histidine (Composé 35, 92%) est
obtenu sous forme d'un solide amorphe beige.
RMN-H 1 (D 20 , 400 MHz) : (ppm) = 1,42 (d, J=7,2 Hz, 3H) ;
3,12 (dd, J=15,2 et J=8,0 Hz, 1H) ; 3,22 (dd, J=15,2 H z et
J=6,2 Hz, 1H) ; 4,05 (q, J=7,2 Hz, 1H) ; 4,65 (m, 1H) ;
8,71 (s, 1H) .
LCMS (APCI) : 258,9 [M+H] +
Exemple 35 : Préparation du disulfure de la 5-sulfanyl
,N (pentanoyl) -histidine (Composé 36) par hydrolyse e
oxydation du composé 5-acétylsulfanyl-a,N(pentanoyl)
histidine
Le dérivé 5-acetylsulf anyl - , (pentanoyl )-histidine
(composé 8 ) est préparé et purifié comme décrit dans
l'exemple 11. 320mg (0,9 mmoles; 1 éq.) du composé 8 sont
solubilisés dans 8,0 ml d'eau déminéralisée. L'acide 3 -
mercaptopropionique (400 ΐ , 4,60 mmoles; 5 éq.) est
ajouté. La solution est chauffée à 90°C pendant 3h. Le
mélange réactionnel est extrait avec 4x10 ml d'acétate
d'éthyle, puis la phase aqueuse est évaporée à sec. Le
résidu est mis en solution dans 10ml d'eau. La solution est
chauffée à 90°C sous agitation pendant 2 heures puis à
température ambiante pendant 18 heures. Après évaporation à
sec, le disulfure de la L-5 -suif anyl - , (pentanoyl )-
histidine (Composé 36) est obtenu sous la forme d'une
laque orange (44%) .
LCMS (APCI) : 541,2 [M+H] +
Tableau 5 : Récapitulatif des exemples :

REVENDICATIONS
Composé de type 5-acylsulf anyl -histidine et
dérivés répondant à la formule générale
suivante :
Dans laquelle :
R1 = H , alkyle, en particulier CH3 ;
R2 = R3 = H , alkyle, en particulier CH3 ;
R4 = H , alkyle, en particulier méthyle,
alkyle (C=0) , alkyle substitué (C=0) , aryle(C=0) ; -
alanyle (H 2NCH2CH2 (C=0) ; -amino-acyle ;
R5 = alkyle, en particulier CH3; phényle ;
ainsi que tous les stéréoisomères ,
diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de
l'atome de carbone portant le groupement COOH, pris
isolément ou en mélange ; et tous les sels d'acides
pharmaceutiquement acceptables dudit composé de formule
générale (I) .
Composé selon la revendication 1 , caractérisé en ce
que R4 représente hydrogène, ou le groupe CH3, ou le
groupe acétyle, ou le groupe benzoyle, ou le groupe
-alanyle (H 2NCH2CH2 (C=0) ;
Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé
en ce qu'il est choisi parmi le groupe consistant
de :
la L-5-acétylsulf anyl-histidine (Composé 1 ) ;
la L -5-acétylsulf anyl - , , (diméthyl )-histidine
(Composé 2 ) ;
la L -5-acétylsulfanyl -a,N,N,N (triméthyl) -histidine
(Composé 3 ) ;
la L -5-acetylsulfanyl - , (glycinyl) -histidine
(Composé 4 )
la L-5-acetylsulf anyl - , , (diméthyl- 1-méthyl -
histidine (Composé 5 )
la L -5-acétylsulfanyl -a,N,N,N (triméthyl) -1-méthylhistidine
(Composé 6 )
la L -5-acetylsulf anyl - , (alanyl) -histidine
(Composé 7 )
la L-5-acétylsulfanyl - , (pentanoyl) -histidine
(Composé 8 )
la L -5 -acétylsulf anyl - , (méthyl) -histidine
(Composé 9 ) ;
la L -5-acétylsulf anyl - , (acétyl) -histidine
(Composé 10) ;
la L -5 -acétylsulf anyl - , (benzoyl )-histidine
(Composé 11) ;
la L -5-acétylsulfanyl - , (-alanyl) -histidine
(Composé 12) ;
la L -1-méthyl -5 -acétylsulf anyl-histidine
(Composé 13) ;
la L -5 -benzoylsulf anyl-histidine (Composé 14) ;
la L -5-benzoylsulf anyl - , , (diméthyl )-histidine
(Composé 15) ;
la L-5-benzoylsulfanyl -a,N,N,N (triméthyl) -histidine
(Composé 16)
la L -5 -acétylsulf anyl - , (phenylalanyl )-histidine
(Composé 17) .
Composé selon l'une des revendications précédentes,
caractérisé en ce que l ' acide pharmaceutiquement
acceptable précité est choisi parmi un acide minéral
tel que chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique,
sulfurique, tartrique, phosphorique ou parmi un
acide organique tel que l ' acide formique, acétique,
trif luoro-acétique , propionique, benzoïque,
maléique, fumarique, succinique, citrique, oxalique,
glyoxylique, aspartique ; un acide alcane-sulf onique
tel que un acide méthane -suifonique,
trif luorométhane- suifonique, éthane- suifonique, un
acide aryl- suifonique tel que l ' acide benzène- et
paratoluène-sulf onique .
5 . Procédé (A) de préparation du nouveau composé de
type 5-acylsulf anyl -histidine et ses dérivés de formule
générale (I), selon l'une des revendications 1 à 4 ,
caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
1 ) La réaction de 1'histidine , racémique (DL) ou l'un
de ses énantiomères (D ou L ) , ou
- l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en position 1
du noyau imidazole, racémique (DL) ou l'un de ses
énantiomères (D ou L ) ,
ou
- l'un de ses dérivés alkylé ou acylé sur l'azote de
la fonction -amine, racémique (DL) ou l'un de ses
énantiomères (D ou L ) ,
ou
- l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en position 1
du noyau imidazole et alkylé ou acylé sur l'azote de la
fonction -amine, racémique (DL) ou l'un de ses
énantiomères (D ou L ) ,
en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou
organique, avec
a ) un agent générateur d'ion halogénium X+ dans un
solvant protique polaire, à température comprise
entre 0-25°, puis avec
b ) un réactif soufré de type acide carbothioïque de
formule alkyle C(=0)SH ou l'un de ses sels dans un
solvant protique polaire,
puis
2 ) éventuellement la purification par chroma tographie
liquide sur colonne ou tout autre méthode de
purification bien connue de l'Homme de l'Art.
. Procédé selon la revendication 5 , caractérisé en ce
que l'agent générateur d'ion halogénium X+ est choisi
parmi :
du brome Br2, en tant que réactif commercial ou
préparé in situ; ou
du NBS ou tout dérivé N-bromo- imide et N-bromoamide
. Procédé selon la revendication 5 ou 6 , caractérisé en
ce que le solvant protique polaire est de l'eau ou
une solution aqueuse.
. Procédé selon l'une des revendications 5 à 7 ,
caractérisé en ce que le réactif soufré de type
acide carbothioïque est choisi parmi l'acide
thioacétique , l'acide thiobenzoïque , le thioacétate
de potassium, ou leurs mélanges.
. Procédé selon l'une des revendications 5 à 8 ,
caractérisé en ce que la température est comprise
entre 0-5°C.
0 . Utilisation du composé de type 5-acylsulfanylhistidine
et de ses dérivés répondant à la formule
générale (I) tel que défini à l'une des
revendications 1 à 4 pour la fabrication de composé
de type 5-sulf anylhistidine et de ses dérivés
répondant à la formule générale (II) suivante :
(II)
Dans laquelle :
R1 à R4 étant tels que précédemment définis à
l'une des revendications 1 à 4 , étant entendu que lorsque
R1 = H alors R2 , R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément
H .
11 Composé de type 5 -suifanylhistidine et ses
dérivés répondant formule générale (il)
suivante :
II)
Dans laquelle :
R1 à R4 étant tels que précédemment définis à
l'une des revendications 1 à 4 ; étant entendu que lorsque
R1 = H alors R2 , R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément
H .
Ainsi que tous les stéréo- isomères , diastéréoisomères
et énantiomères notamment au niveau de l'atome de carbone
portant le groupement COOH, ainsi que tous les disulfures
correspondants, pris isolément ou en mélange ; tous les
sels d'acides pharmaceutiquement acceptables desdits
composés de formule générale (II) .
12. Composé de formule générale (II), selon la
revendication 11, caractérisé en ce que R4
représente hydrogène, ou le groupe méthyle, ou le
groupe acétyle, ou le groupe benzoyle, ou le groupe
-alanyle (H 2NCH 2CH2 (C=0) ;
13. Composé de formule générale (II) , selon la
revendication 11, caractérisé en ce qu'il est choisi
parmi le groupe consistant de :
le disulfure de la L-5 -suifanyl -a, (méthyl )-
histidine (Composé 22) ;
la L-5-sulf anyl - , (méthyl) -histidine (Composé 23) ;
le disulfure de la L-5-sulf anyl - , (diméthyl) -
histidine (Composé 24) ;
la L-5-sulfanyl - ,N , (diméthyl) -histidine (Composé
25) ;
la L-5-sulfanyl -a,N,N,N (triméthyl) -histidine
(Composé 26) ;
le disulfure de la L-5 -suifanyl - , , , (triméthyl )-
histidine (Composé 27) ;
le disulfure de la L-5-sulf anyl - (acétyl) -histidine
(Composé 28) ;
la L-5-sulf anyl - , (acétyl) -histidine (Composé 29) ;
la L-5-sulf anylcarnosine (Composé 30) ;
le disulfure de 1 'iso-ovothiol A (Composé 31) ;
1 'iso-ovothiol A (Composé 32) ;
le disulfure de la L-5-sulfanyl - ,N , (diméthyl) -1-
méthyl-histidine (Composé 33) ;
la L-5-sulfanyl -a,N,N,N (triméthyl) -1-méthylhistidine
(Composé 34) ;
la L-5 -suifanyl - , (alanyl )-histidine (Composé 35) ;
et
le disulfure de la 5-sulfanyl - , (pentanoyl) -
histidine (Composé 36)
14. Composé de formule générale (II) , selon la
revendication 11, 12 ou 13, caractérisé en ce que
l'acide pharmaceutiquement acceptable précité est
choisi parmi un acide minéral tel que chlorhydrique ,
bromhydrique , iodhydrique, sulfurique, tartrique,
phosphorique ou parmi un acide organique tel que l '
acide formique, acétique, trif luoro-acétique ,
propionique, benzoïque, maléique, fumarique,
succinique, citrique, oxalique, glyoxylique,
aspartique ; un acide alcane-sulf onique tel que un
acide méthane -suifonique , trif luorométhanesulfonique,
éthane- suifonique, un acide arylsuifonique
tel que l ' acide benzène- et paratoluènesulfonique
.
15. Procédé (B) de préparation des composés de type 5 -
sulfanylhistidine et de leurs dérivés de formule générale
(II) obtenus à partir des composés de type 5-acylsulf anyl -
histidine et de leurs dérivés de formule générale (I)
décrit dans le procédé A selon l'une des revendications 5 à
9 , caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
1 ) Soit directement (procédé Bl) :
e ) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanylhistidine
obtenus selon l'invention dans un
solvant protique polaire par agitation à
température supérieure à 20°C en présence d'un
thiol ,
f ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art .
2 ) Soit indirectement (procédé B2) :
f ) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanylhistidine
obtenus selon l'invention dans un
solvant protique polaire par agitation à une
température supérieure à 20°C pour obtenir le
disulfure correspondant,
g ) puis réduction du disulfure par réaction avec un
thiol ,
h ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout
autre méthode de purification bien connue de
l'Homme de l'Art.
16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé
en ce que le solvant protique polaire est choisi
parmi l'eau ou une solution aqueuse.
17. Procédé selon les revendications 15 ou 16,
caractérisé en ce que le thiol est choisi parmi
l'acide mercaptopropionique , le dithiothréitol ou
leurs mélanges.
18. Procédé selon l'une des revendications 15 à 17,
caractérisé en ce que la température est comprise
entre 20 et 130°C.
19. Procédé (C) de préparation de disulfures des 5 -
suifanylhistidines et de leurs dérivés définis à
l'une des revendications 15 à 18, caractérisé en ce
que les dits disulfures sont préparés :
i ) soit directement à partir des composés de type
5-acylsulf anyl -histidine et de leurs dérivés de
formule générale (I) caractérisé en ce qu'il
comprend les étapes suivantes :
a ) hydrolyse des dérivés 5-acylsulf anyl -histidine de
formule générale (I) obtenus selon
l'invention dans un solvant protique polaire par
agitation à l'air et à une température supérieure à
20°C pour obtenir le disulfure correspondant,
b ) puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art ;
ii) soit à partir de 5-sulfanylhistidines et de leurs
dérivés de formule générale (II) caractérisé en ce
qu'il comprend les étapes suivantes :
c ) oxydation de la 5-sulf anylhistidine ou de ses
dérivés par l'oxygène ou le diméthyl suifoxyde ou
toute autre méthode d'oxydation bien connue de
1'Homme de 1'Art ,
puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art .
20. Procédé (D) en « one-pot » de préparation des
dérivés 5-sulf anylhistidines et leurs disulfures
correspondants à partir des dérivés histidines
correspondants, en combinant les procédés (A) avec
(B) ou avec (C) tels que précédemment définis
respectivement aux revendications 5 à 9 ; 15 à 18 et
19, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes
suivantes :
en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou
organique, la réaction avec
c ) un agent générateur d'ion halogénium X+ dans un
solvant protique polaire, à température comprise
entre 0-25°, puis avec
d ) un réactif soufré de type acide carbothioïque de
formule alkyleC (=0) SH ou l'un de ses sels dans un
solvant protique polaire,
suivie de
1 ) Soit :
g ) l'hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl-histidine
obtenus dans un solvant protique polaire par
agitation à température comprise entre 70 et
130°C en présence d'un thiol,
h ) puis éventuellement la purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout autre
méthode de purification bien connue de l'Homme de
1'Art .
2 ) Soit :
j ) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanylhistidine
obtenus dans un solvant protique
polaire par agitation à une température comprise
entre 70 et 130°C pour obtenir le disulfure
correspondant ,
puis éventuellement purification par
chromatographie liquide sur colonne ou tout
autre méthode de purification bien connue de
1'Homme de 1'Art .